一、 陽性對照

可使用已知含有目標蛋白的內源性可溶樣品，或已知含有檢測抗體免yi原的純化蛋白或多肽來作為陽性對照。當樣品的檢測結果為陰性時，陽性對照的陽性結果可表明實驗過程無誤且有效，所以實驗的陰性結果是真實的。

我們建議閱讀抗體的產(chǎn)品說明書，通常其中會有適合的陽性對照推薦。如果沒有對照推薦，我們建議如下：

檢查抗體是否存在任何 Abreviews®。成功實驗結果中所使用的任何組織、細胞或裂解物均可被視為適合的陽性對照。

打開說明書上的 Swiss-Prot  或 Omnigene 數(shù)據(jù)庫鏈接。這些數(shù)據(jù)庫通常會有蛋白表達水平的組織列表。高表達的組織也可被視為陽性對照。

在 GeneCards 中搜索目標蛋白。這里通常會為您提供各種組織中目標蛋白的表達水平。

如果您仍然難以找到合適的對照，我們建議在 PubMed 上進行一次快速的文獻檢索，查看哪些組織和細胞表達目標蛋白。

二、陰性對照

陰性對照指的是已知不表達目標蛋白的樣品。其有助于檢測非特異性結合和假陽性結果。為驗證結果，您使用的每個微孔板均應包含一份陰性對照樣品。

三、標準品

標準品是一種含有已知濃度的目標蛋白的樣品，可從中獲得標準曲線。例如，以下是我們的小鼠 IL6 ELISA 試劑盒的典型標準曲線，濃度范圍為 15.6 至 500 pg/mL。標準曲線不佳意味著抗體未正確結合或未捕獲蛋白標準品。趨勢線的 R2 值應 > 0.99。

四、樣本基質（加標對照品）對照中的標準品

在 ELISA 中檢測血清樣品時，按照慣例標準品用正常稀釋緩沖液來稀釋。但我們建議您同時用檢測的種屬血清來稀釋標準品。然后可以將兩者進行比較，以確保血清中的其他蛋白質對標準曲線沒有影響。這就是所謂的加標對照，并可表明目標蛋白在加入基質后的回收率?？山邮艿慕Y果為 80%-120%。

五、內源性陽性對照

如果您正在檢測重組蛋白樣品，我們建議您納入內源性陽性對照。這應該是您實驗的一個必要部分。

重組蛋白的抗體檢測存在一些固有的困難，需要考慮到重組蛋白的折疊可能與內源性天然蛋白的結構不同，并可能阻止抗體結合表位。標簽蛋白的情況尤其如此，所以建議確保標簽位于重組蛋白的N端或C端。

*重要的是，務必確保重組蛋白中包括您所使用的抗體的免yi原序列。內源性陽性對照對驗證實驗結果，以及說明試劑（例如抗體）和實驗過程的有效性，起到重要作用。