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貼壁細胞傳代過程
日期：2025-05-11 22:06
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摘要：貼壁細胞傳代過程（以一個T25瓶為例）：
1、 吸出原培養(yǎng)液；
2、 加入2ml左右PBS，輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細胞，吸出PBS丟棄；
3、 加入1ml左右胰酶，輕輕晃動培養(yǎng)瓶使之浸潤所有細胞，放入培養(yǎng)箱消化；
4、 消化時間跟據(jù)細胞特性有所不同，顯微鏡下看到細胞塊中間的細胞明顯分離變圓，側(cè)立培養(yǎng)瓶細胞可以滑落時可終止消化，全程不要拍打培養(yǎng)瓶；
5、 加入3ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，吹打細胞使之脫落并在液體里反復吹打使細胞，使之盡量呈單顆細胞的懸浮液，這時可以在顯微鏡看下；
6、 收集細胞懸液離心，1200rpm（約250g） 3分鐘，離...
貼壁細胞傳代過程（以一個T25瓶為例）：
1、 吸出原培養(yǎng)液；
2、 加入2ml左右PBS，輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細胞，吸出PBS丟棄；
3、 加入1ml左右胰酶，輕輕晃動培養(yǎng)瓶使之浸潤所有細胞，放入培養(yǎng)箱消化；
4、 消化時間跟據(jù)細胞特性有所不同，顯微鏡下看到細胞塊中間的細胞明顯分離變圓，側(cè)立培養(yǎng)瓶細胞可以滑落時可終止消化，全程不要拍打培養(yǎng)瓶；
5、 加入3ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，吹打細胞使之脫落并在液體里反復吹打使細胞，使之盡量呈單顆細胞的懸浮液，這時可以在顯微鏡看下；
6、 收集細胞懸液離心，1200rpm（約250g） 3分鐘，離心完吸出上清丟棄。
7、 加入新鮮培養(yǎng)基，吹打幾下混勻細胞即可，按需接種到新培養(yǎng)瓶，補足培養(yǎng)基，擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進行培養(yǎng)。
8、 檢查培養(yǎng)箱二氧化碳，溫度和水盤。
1、 吸出原培養(yǎng)液；
2、 加入2ml左右PBS，輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細胞，吸出PBS丟棄；
3、 加入1ml左右胰酶，輕輕晃動培養(yǎng)瓶使之浸潤所有細胞，放入培養(yǎng)箱消化；
4、 消化時間跟據(jù)細胞特性有所不同，顯微鏡下看到細胞塊中間的細胞明顯分離變圓，側(cè)立培養(yǎng)瓶細胞可以滑落時可終止消化，全程不要拍打培養(yǎng)瓶；
5、 加入3ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，吹打細胞使之脫落并在液體里反復吹打使細胞，使之盡量呈單顆細胞的懸浮液，這時可以在顯微鏡看下；
6、 收集細胞懸液離心，1200rpm（約250g） 3分鐘，離心完吸出上清丟棄。
7、 加入新鮮培養(yǎng)基，吹打幾下混勻細胞即可，按需接種到新培養(yǎng)瓶，補足培養(yǎng)基，擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進行培養(yǎng)。
8、 檢查培養(yǎng)箱二氧化碳，溫度和水盤。